ICS 11.020 C 50

WS

中(zhōng)華人民(mín)共和國(guó)衛生行業标準WS/T 224—2018

代替 WS/T 224—2002

真空采血管的性能(néng)驗證

Performance verification of vacuum tubes for venous blood specimen

2018 - 04 - 27 發布 2018 - 11 - 01 實施中(zhōng)華人民(mín)共和國(guó)國(guó)家衛生健康委員會 發 布

前言

WS/T 224—2018

I

1 範圍

 本标準規定了真空采血管性能(néng)要求及驗證方法。 

本标準适用(yòng)于臨床實驗室在正式使用(yòng)新(xīn)采血管前對其進行性能(néng)驗證。對正在使用(yòng)的采血管的檢測結 果有(yǒu)疑問、查找原因可(kě)能(néng)與采血管相關時，也可(kě)采用(yòng)本标準對采血管進行性能(néng)驗證。

2 規範性引用(yòng)文(wén)件

下列文(wén)件對于本文(wén)件的應用(yòng)是必不可(kě)少的。凡是注日期的引用(yòng)文(wén)件，僅注日期的版本适用(yòng)于本文(wén)件。 凡是不注日期的引用(yòng)文(wén)件，其最新(xīn)版本(包括所有(yǒu)的修改單)适用(yòng)于本文(wén)件。

GB/T 6682 分(fēn)析實驗室用(yòng)水規格和試驗方法

3 術語和定義

 下列術語和定義适用(yòng)于本文(wén)件。 

在一個标本采集管中(zhōng)，添加的任何促進一個預定功能(néng)(如防止凝血或糖酵解)的試劑。注:盡管容器蓋不被認為(wèi)是一種添加劑，但它可(kě)能(néng)含有(yǒu)或塗覆添加劑，若它們進入标本中(zhōng)接觸，應被認為(wèi)是添加劑。

 檢測結果的預期值與可(kě)接受值之間的差異。 

WS/T 224—2018

真空采血管的性能(néng)驗證

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WS/T 224—2018注:管蓋的作(zuò)用(yòng)使采血後容器的口部與外界形成隔離以确保安(ān)全，一般管蓋内部還有(yǒu)一個能(néng)與容器口部形成密封的

密閉容器的組件。塞體(tǐ)以保護血樣，本标準稱其為(wèi)管蓋而不稱其為(wèi)塞子，目的是突出其安(ān)全作(zuò)用(yòng)。

3.7

3.8

3.10

采血管附加物(wù) receptacle accessory

生産(chǎn)者放于采血管内部，以有(yǒu)助于采集、混合或分(fēn)離樣品的部件。示例:放入血清或血漿采血管中(zhōng)的小(xiǎo)型塑料惰性球(或分(fēn)離膠)，用(yòng)于離心後從血液中(zhōng)分(fēn)離血清或血漿。

研究中(zhōng)實際觀測或調查的一部分(fēn)個體(tǐ)。通過檢查、研究和分(fēn)析樣本的特征來反映總體(tǐ)情況。

3.12

驗證 verification

通過提供客觀證據對規定要求已得滿足的認定。注:終端用(yòng)戶(臨床實驗室)有(yǒu)責任驗證制造商(shāng)生産(chǎn)的器械性能(néng)。

4 真空采血管的性能(néng)驗證4.1 外觀

重量測定分(fēn)析法 gravimetric analysis

通過稱重和校正液體(tǐ)的質(zhì)量密度測定液體(tǐ)體(tǐ)積的方法。注:本文(wén)件中(zhōng)，以1000mL水的質(zhì)量為(wèi)1000g。

抽吸量 draw volume，DV

從靜脈穿刺處負壓吸至真空采血管中(zhōng)的血液的體(tǐ)積。注:在标準條件(溫度18°C~25°C，标準大氣壓)下，真空采血管采水到平衡時的總重量。

2

WS/T 224—2018試管應透明，無異物(wù);試管無變形和破損;标識應清晰(真空采血管标簽及管蓋顔色國(guó)際通用(yòng)标準

參見附錄A);管蓋無脫落;采血管内的分(fēn)離膠的膠體(tǐ)應呈凝膠狀。

4.2 抽吸量4.2.1 要求

抽吸量應準确，抽吸量與公(gōng)稱液體(tǐ)容量的相對偏倚應在-10%~10%之間。

4.2.2 驗證方法4.2.2.1 試劑

水，符合GB/T 6682的三級水的要求，溫度在18°C~25°C。

4.2.2.2 儀器

500mL燒杯;考察管;濾紙;分(fēn)析天平;20G(内徑38mm)标準雙向軟連接采血針。

4.2.2.3 取樣

采用(yòng)一次抽樣方案取樣，随機抽取30支，按照标準操作(zuò)進行采水，記錄相關數據。

4.2.2.4 步驟(重量測定分(fēn)析法)

1. a)  将 500mL 的燒杯裝(zhuāng)滿水;

2. b)  将 1~30 支管進行編号且稱重，這為(wèi)采血管的初始重量，記為(wèi) Wi1，其中(zhōng) i 為(wèi) 1~30;

3. c)  将采血針的靜脈穿刺針(穿透一個純膠塞)浸入盛滿水的燒杯中(zhōng)，另一端的管塞穿刺針刺穿真 空采血管的膠塞進行采水，保持采血管的高度與水液面的高度大緻一緻，采水達到平衡時拔管;

4. d)  依次将編号為(wèi) 1~30 的采血管進行采水，注意燒杯内水的液面高度與采血管的液面高度保持在 同一水平線(xiàn)上;

5. e)  采水完畢，用(yòng)濾紙吸取膠塞表面可(kě)能(néng)殘留的水分(fēn);

6. f)  然後将采水後編号為(wèi) 1~30 的采血管進行稱重，這是真空采血管采水後的重量，記為(wèi) Wi2，其 中(zhōng) i 為(wèi) 1~30;

7. 
   

   g)  抽吸量的計算見式(1):
   DV=( W i 2 - W i1 )/N ................................. (1)

   
   

   式中(zhōng):

   Wi1----采血管的初始重量，單位為(wèi)克(g);Wi2----采血管采水後的重量,單位為(wèi)克(g);i ----自然數編号，範圍為(wèi)1~30;

   
   

   DV----抽吸量，單位為(wèi)克(g);
   N ----檢測對象的總量，即 N=30。注:本标準中(zhōng)，以 1000mL 水的質(zhì)量為(wèi) 1000g。

   
   

8. h)  抽吸量與公(gōng)稱液體(tǐ)容量之間的相對偏差(relative deviation，簡寫為(wèi) RD)，其計算見式(2):3

NN i1 i1

WS/T 224—2018RD=(DV-NLC)/NLC×100% ................................. (2)

4.3 管體(tǐ)強度4.3.1 要求

采血管在水平式離心機下應能(néng)承受 3000g 的相對離心力，即測試采血管在充裝(zhuāng)水至刻度線(xiàn)的條件 下，用(yòng)水平式離心機采用(yòng) 3000g 的相對離心力，離心 10min 而不發生破裂或洩露。

4.3.2 驗證方法4.3.2.1 試劑

水，符合GB/T 6682的三級水的要求，溫度在18°C~25°C。

4.3.2.2 儀器

500mL燒杯;水平離心機，最大能(néng)提供5000g相對離心力。

4.3.2.3 步驟

1. a)  随機抽取 30 支采血管充裝(zhuāng)水至刻度線(xiàn)，并保持采血管外觀幹淨，無液體(tǐ);

2. b)  将 30 支采血管放入水平離心機中(zhōng)，注意離心機的平衡;

3. c)  設置離心參數，當轉速穩定時的最大相對離心力為(wèi) 3000g，離心時間為(wèi) 10min(例:離心半徑 為(wèi) 17cm，轉速為(wèi) 4000r/min，離心 10min);

4. d)  離心機停止後，小(xiǎo)心取出采血管;

5. e)  觀察采血管外壁是否有(yǒu)液體(tǐ)滲漏。

4.4 血清分(fēn)離管纖維蛋白挂壁4.4.1 要求

按照 4.4.2.2 的步驟進行測試，血清分(fēn)離管離心後不應出現纖維蛋白挂壁。注:若采用(yòng)分(fēn)離膠促凝管進行測試時，可(kě)以增加評估分(fēn)離膠的性能(néng)。

4.4.2 驗證方法4.4.2.1 儀器

考察管;采血針;醫(yī)用(yòng)消毒用(yòng)具(jù);40 個靜脈血标本;水平離心機;試管架。

4.4.2.2 步驟

1. a)  試驗條件:溫度為(wèi) 18°C~25°C，壓力為(wèi)當地的環境大氣壓;

2. b)  将采血管進行編号，考察管依次為(wèi) 1~40;

3. c)  按照标準的采血操作(zuò)流程進行采血，每個人采 1 支管，采血後立刻進行搖勻(按照制造商(shāng)規定 的搖勻次數)，然後豎直放置在試管架上靜置;

4

1. d)  當全部 40 個人采完血後，開始記時;

2. e)  30min 後将 40 支管一次全部放入離心機中(zhōng)進行離心操作(zuò);

4.5 溶血情況4.5.1 要求

按照 4.4.2.2 的步驟進行測試，采血管采血後進行離心，不應出現溶血(排除臨床原因)。4.5.2 驗證方法

1. a)  按照 4.4.2.1、4.4.2.2a)~f)的内容進行操作(zuò);

2. b)  離心觀察并記錄 40 支考察管的血清或血漿質(zhì)量情況。

4.6 抗凝管的凝血情況4.6.1 要求

按照 4.4.2.2 的步驟進行采血，抗凝管中(zhōng)充分(fēn)混勻的血液标本在顯微鏡下觀察應無凝塊。4.6.2 驗證方法

1. a)  按照 4.4.2.1、4.4.2.2 a)~d)的内容進行操作(zuò);

2. b)  3h 後用(yòng)顯微鏡對 40 個标本進行觀察是否有(yǒu)凝塊。

注:4.4~4.6三項指标的評價可(kě)以結合臨床性能(néng)評價一起進行測試。

4.7 無菌4.7.1 要求

真空采血管内腔應無菌，即按照 4.7.2.3 的步驟進行測試，結果判定為(wèi)合格。

4.7.2 驗證方法4.7.2.1 試劑

75%酒精(jīng)溶液;75%酒精(jīng)棉球;硫乙醇酸鹽液體(tǐ)培養基;改良馬丁培養基;0.9%無菌氯化鈉溶液。

4.7.2.2 儀器

隔水式恒溫培養箱;生化培養箱;生物(wù)顯微鏡;自動高壓滅菌器;電(diàn)熱恒溫幹燥箱;酒精(jīng)燈;火機; 鑷子。

4.7.2.3 步驟

a) 抽樣:任意抽取需考察的采血管 10 支;

b) 供試液的制備:含液體(tǐ)的采血管如凝血功能(néng)檢測管、血沉檢測管，以其管内含有(yǒu)的液體(tǐ)為(wèi)供試 液;不含液體(tǐ)的¢16mm×100mm 采血管用(yòng) 5mL0.9%無菌氯化鈉溶液進行振蕩溶解，作(zuò)為(wèi)供試液 備用(yòng);不含液體(tǐ)的¢13mm×100mm 的采血管用(yòng) 4mL0.9%無菌氯化鈉溶液進行振蕩溶解，作(zuò)為(wèi)供

WS/T 224—2018

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WS/T 224—2018試液備用(yòng);不含液體(tǐ)的¢13mm×75mm 的采血管用(yòng) 3mL0.9%無菌氯化鈉溶液進行振蕩溶解，作(zuò)為(wèi)

供試液備用(yòng);

c) 供試樣品的培養:将供試液置于裝(zhuāng)有(yǒu)硫乙醇酸鹽液體(tǐ)培養基、改良馬丁培養基的容器中(zhōng)進行培 養;

1. d)  培養及觀察:上述含培養基的容器按規定的溫度(細菌 30°C~35°C，真菌 23°C~28°C)培養14d。培養期間應逐日觀察并記錄是否有(yǒu)菌生長(cháng)。若出現異常時則每天上、下午各觀察一次。 如在加入供試品後或在培養過程中(zhōng),培養基出現渾濁，培養 14d 後，不能(néng)從外觀上判斷有(yǒu)無菌 生長(cháng)，可(kě)取該培養液适量轉種至同種新(xīn)鮮培養基中(zhōng)或劃線(xiàn)接種于斜面培養基上，細菌培養 2d,真菌培養 3d，觀察接種的同種新(xīn)鮮培養基是否再出現渾濁或斜面上有(yǒu)無菌生長(cháng);或用(yòng)接種環 取培養液塗片，染色，鏡檢，進行判斷是否有(yǒu)菌生長(cháng)。

2. e)  陰性對照:取同一批号空白硫乙醇酸鹽流體(tǐ)培養基、改良馬丁培養基各一支作(zuò)為(wèi)陰性對照。陰 性對照不得有(yǒu)菌生長(cháng)。

3. f)  陽性對照:在生物(wù)安(ān)全櫃操作(zuò)，接種金黃色葡萄球菌至營養肉湯培養基中(zhōng)，30°C~35°C培養18h~24h。用(yòng) 0.9%無菌氯化鈉溶液制成小(xiǎo)于 100CFU/mL 的菌懸液。菌懸液制備後保存在 2°C~8°C，24h 内使用(yòng)。接種 1mL 小(xiǎo)于 100CFU 的金黃色葡萄球菌菌懸液于硫乙醇酸鹽流體(tǐ)培養基中(zhōng)， 應生長(cháng)良好。

4. g)  結果判定:當供試品管液體(tǐ)均顯澄清，陰性對照管液體(tǐ)均顯澄清，陽性對照管液體(tǐ)顯渾濁時供 試品管為(wèi)合格;當陰性對照管液體(tǐ)顯澄清，陽性對照管液體(tǐ)顯渾濁，供試品管液體(tǐ)顯渾濁時供 試品管為(wèi)不合格;當陰性對照管液體(tǐ)顯渾濁或陽性對照管液體(tǐ)顯澄清時，實驗無效。

一般情況下，應對臨床檢測報告上的檢測項目進行可(kě)比性驗證，可(kě)優先對附錄B中(zhōng)的檢測項目進行 驗證。

4.8.2 确定用(yòng)于檢測的檢測儀器

實施結果比對時，應對用(yòng)于檢測臨床樣本的檢測系統進行可(kě)比性驗證。

4.8.3 比對樣本4.8.3.1 樣本選擇

 采用(yòng)來自于不同患者的臨床樣本作(zuò)為(wèi)比對樣本。 

4.8.3.2 樣本濃度水平

樣本濃度應在方法的線(xiàn)性範圍内，并覆蓋醫(yī)學(xué)決定水平。分(fēn)析樣本的濃度應盡可(kě)能(néng)在線(xiàn)性範圍内均 勻分(fēn)布。

4.8.4 要求

可(kě)比性驗證的可(kě)接受标準應滿足臨床需要，同時考慮檢測系統的性能(néng)狀況。 不同項目分(fēn)析質(zhì)量要求可(kě)采用(yòng)國(guó)家認可(kě)機構設置的分(fēn)析質(zhì)量的最低标準。 采血管不同項目比對結果的相對偏倚若符合分(fēn)析質(zhì)量要求，表明考察管可(kě)滿足臨床應用(yòng)要求。

6

4.8.5 驗證方法4.8.5.1 采血管選擇

隻需使用(yòng)兩種不同的采血管一個批号的産(chǎn)品同時采血進行實驗,一種是比對管，一種是考察管。

4.8.5.2 樣本要求

至少分(fēn)析20個不同的臨床患者樣本。隻有(yǒu)在室内質(zhì)控合格的情況下，實驗室數據才有(yǒu)效。

4.8.5.3 線(xiàn)性回歸分(fēn)析4.8.5.3.1 拟合線(xiàn)性回歸方程

以比對管的檢測值為(wèi)X，考察管的檢測值為(wèi)Y進行線(xiàn)性拟合。利用(yòng)所有(yǒu)樣本測定的有(yǒu)效數據，線(xiàn)性回 歸方程見式(3):

式中(zhōng):b----直線(xiàn)的斜率;a----直線(xiàn)的截距;X----比對管的檢測值;Y----考察管的檢測值。

4.8.5.3.2 計算線(xiàn)性回歸相關系數

Y=bX+a ......................................... (3)

利用(yòng)所有(yǒu)樣本測定值進行線(xiàn)性回歸後得相關系數(以r或R2表示)。

4.8.5.3.3 線(xiàn)性回歸相關系數判定

如果r≥0.975(或R2≥0.95)，則認為(wèi)選擇的數據範圍适合，數據滿足要求。該分(fēn)析的誤差可(kě)以由數 據範圍給以适當補償，并且可(kě)以采用(yòng)簡單的線(xiàn)性回歸方程來評價斜率和截距。

如果R2<0.95，那麽必須通過分(fēn)析另外一些樣品以擴大數據範圍，然後再檢查全部數據系列，如仍 然R2<0.95，則應尋找待評價方法存在的缺陷，糾正後重新(xīn)進行試驗。

4.8.5.4 相對偏倚的計算及判定4.8.5.4.1 相對偏倚的計算

将醫(yī)學(xué)決定水平(以Xc表示)代入式(3)，得到預期偏倚(以Bx表示),其計算見式(4):Bx=a+(b-1)Xc ..................................... (4)

式中(zhōng):Xc----醫(yī)學(xué)決定水平;Bx----預期偏倚;

Rb=Bx/Xc×100% ...................................... (5)

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Rb----相對偏倚。

4.8.5.4.2 相對偏倚的判定

不同檢測項目的相對偏倚應符合國(guó)家認可(kě)機構設置的分(fēn)析質(zhì)量的最低标準。

4.8.6 可(kě)比性驗證結果不符合要求的處理(lǐ)措施

對于不符合可(kě)比性驗證要求的采血管，應分(fēn)析原因，必要時采取相應的糾正措施，其後應對其進行 比對，确認比對結果符合分(fēn)析質(zhì)量要求。

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AA

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9

參考文(wén)獻

[1] Validation and Verification of Tubes for Venous and Capillary Blood Specimen Collection; Approved Guideline. CLSI document GP34-A.

[2] Method Comparison and Bias Estimation Using Patient Samples; Approved Guideline – Second Edition (Interim Revision). CLSI document EP09-A2-IR.

[3] Procedures for the Handling and Processing of Blood Specimens for Common Laboratory Tests; Approved Guideline – Fourth Edition. CLSI document GP44-A4.

[4] User Verification of Performance for Precision and Trueness; Approved Guideline – Second Edition. CLSI document EP15-A2.

[5] Tubes and Additives for Venous and Capillary Blood Specimen Collection; Approved Standard – Sixth Edition. CLSI document GP39-A6.

1. [6]  YY/T 0314—2007 一次性使用(yòng)人體(tǐ)靜脈血樣采集容器

2. [7]  YY/T 0617—2007 一次性使用(yòng)人體(tǐ)末梢血樣采集容器

3. [8]  CNAS—CL38—2012 醫(yī)學(xué)實驗室質(zhì)量和能(néng)力認可(kě)準則在臨床化學(xué)檢驗領域的應用(yòng)說明

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